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数字PCR

发布时间: 2017-07-18 发布人:

数字PCR

  数字PCR即digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术。数字PCR与传统定量 PCR(qPCR)技术不同,数字 PCR 采用绝对定量的方式,不依赖于标准曲线和参照样本,直接检测目标序列的拷贝数,检测极限可达单拷贝,具有比传统 qPCR 更加出色的灵敏度、特异性和精确性。

 ddPCR(droplet digital PCR)是基于微液滴平台的数字PCR技术,拥有比其他数字PCR技术更高的分辨率和检测灵敏度。

 ddPCR工作原理是:首先通过微液滴生成仪将含待测样品均分到大量直径为微米级的“油包水”微液滴中,体积为皮升级,数量为十万到百万级。由于微液滴数量足够多,微液滴之间被油层相互隔离,因此每个微液滴相当于一个“微型PCR孔”,微液滴中只含有待测样品的单分子DNA;针对这些单分子DNA在每个微液滴中进行PCR扩增反应,完成荧光标记和信号放大。通过微液滴分析仪对每个微液滴荧光信号进行检测,有荧光信号的微滴判读为1,意味着有一个初始DNA分子,没有荧光信号的微滴判读为0,意味着没有初始DNA分子。根据泊松分布原理实现对核酸样本的绝对定量。 

数字PCR

ddPCR技术在痕量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面具有极大的优势,从而可以使癌症的液体活检、无创产前筛查、感染性疾病的早期检测等重大医学挑战更加容易实现。



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